超声内镜引导下细针穿刺活检(endoscopic ultrasound-guided fine-needle aspiration biopsy, EUS-FNA)是指在EUS实时引导下对病变部位进行细针穿刺获取细胞、组织或体液标本，从而获得细胞学和(或)病理学等诊断的检查方法，近年来EUS-FNA在消化道管壁邻近组织占位性疾病中的诊断中得到了越来越多的肯定，已被认为是胰腺疾病诊断的最先进、最准确技术。
1）术前准备好穿刺针与负压注射器，也可以用 一次性注射器代替。初学者建议备好穿刺针与负压注射器后，将穿刺针插人并安置于内镜腔道内，调节穿刺针外鞘长度，使之处于合适的长度，锁住安全锁。取出穿刺针，插入超声内镜对患者行检查，显示病变，并选择合适的穿刺位置，应用彩色多普勒功能扫查穿刺区域内的血管，以避免误伤血管。
2）将穿刺针缩回外鞘并锁定，将针连同外鞘插入超声内镜工作管道，穿刺针手柄固定于内镜工作管道外口。
3）确定穿刺位置，解除手柄上的锁，推进穿刺针约1cm直至在声像图上见到抵住消化道壁的针尖。在声像图上针尖显示为线状强回声，并可有金属产生的“彗星尾”。
4）如穿刺针为球形头针芯，则需后退针芯几毫米，使针尖锐利，.在超声引导下将穿刺针刺人目标。
5）.当针尖进入目标内，如使用穿刺针为球形头针芯，需将针芯插回原来的位置，将针道内混入的不需要的组织排除，然后彻底拔出针芯；如使用穿刺针为楔形头针芯，直接拔出针芯。
6）连接已准备好的负压注射器，打开负压阀。在EUS的监视下，保持针尖在病灶中，来回提插。为了提高穿刺阳性率，在提插操作中每次进针时稍微更改穿刺方向，使穿刺路径在病变内形成扇形。
7）.每针结束后，缓慢释放负压，拔出穿刺针。
8）对EUS-FNA取得的组织进行处理，根据用于组织学评估还是细胞学评估选择相应的处理方法。观察取材量，决定是否重复操作和重复操作时在组织内提插的次数，原则上应重复2到3次操作。如有快速现场病理评估的帮助，可判断取材是否充足，增加EUS-FNA的准确性。
9）检查结束后需密切观察患者是否有并发症发生（出血、穿孔、胰腺炎和感染等）。目前尚缺乏术后是否应当应用质子栗抑制剂的研究。同样抗生素也不在穿刺术后常规应用。在囊性病变穿刺前可酌情预防性应用抗生素。
